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稳定株的研究细胞库(RCB)构建
稳定株的研究细胞库(RCB)构建
符合药监法规的、满足工业生产用的CHO细胞稳定株的抗体药物表达产量,可以达到50-100p/c/d,相当于体内专职分泌细胞的水平。获得如此高产的CHO细胞稳定株,通常是通过‘选择宿主细胞’、‘优化抗体基因表达质粒’、‘优化宿主细胞稳定株的筛选和扩增方法’以及‘用基因工程修饰宿主细胞’等多个方面,并获得这些方面的正向协同效应来达到的。过去10多年的蛋白组学和转录组学的研究表明,高产细胞株的形成涉及细胞内许多通路的改变,不是几个主要节点的大变化,更可能是大量基因表达水平的微小变化;没有任何一种重要调控因素能使这些宿主细胞变成高产细胞株。
获得‘满足工业生产用的抗体表达的宿主细胞稳定株’的基础,是早期拿到优质的RCB。获得抗体药物高产的细胞稳定株的基本步骤如下图:
细胞稳定株和药监法规要求
细胞稳定株和药监法规要求:
构建生产用的细胞株系,是重组抗体药物的大规模生产制备的第一步。目前国际上常见的生产重组抗体的工程细胞系是哺乳动物细胞,主要包括CHO、HEK293、NS0和SP2/0细胞。这些工程细胞系需要具备以下特性:生长特性良好,无血清悬浮培养密度高(1~2×10^7cells/ml);异源蛋白表达能力强(20~70 p/c/d),具备正确的翻译后修饰能力;宿主及重组细胞系的遗传背景清晰、表型稳定,符合ICH法规要求。
基于CHO细胞糖基结构改造的人源抗体开发技术
针对抗体效应机制进行抗体定制设计和开发
单克隆抗体(mAbs)的功能与其结构密切相关。抗体结合区域(antigen-binding fragment, Fab)能够特异地识别肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen, TAA),从而调控TAA相关的下游信号通路[2]。可结晶区域(crystalline fragment, Fc)能够和表达在各类免疫白细胞上的Fcγ受体(Fcγ receptors,FcγR) 结合,从而招募和激活这类细胞,引发抗体依赖的细胞毒性作用(ADCC)和抗体依赖细胞介导的吞噬作用(ADCP),清除目标肿瘤细胞。Fc也能够结合血清补体分子(C1q),继而形成膜攻击复合物(MAC)清除目的细胞,即补体依赖的细胞毒性(CDC)。此外,Fc还能够以pH依赖的方式结合新生的Fc受体(FcγRn),避免抗体被细胞降解,从而延长单抗的半衰期[1-3]。
Afucosylated Antibodies
Fut8-/- CHO-K1 Cells
Wild-Type Antibodies
HEK293FT Cells
CHO-K1 Cells
Recombinant Proteins
HEK293FT Cells
CHO-K1 Cells