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抗体糖基化改造技术

       抗体是可溶性血清糖蛋白。其功能不仅由其氨基酸序列决定，而且抗体糖基化修饰影响稳定性和可溶性，决定了其临床疗效，因此抗体糖基化成为单抗药物的一个关键质量属性（CQA）。
       治疗性抗体的糖基化形式主要为Fc N-糖基化修饰的结构，位于CH2区的共有序列（Asn297-X-Ser/Thr）。Fc糖基化修饰具有复杂性：双天线型核心结构（由甘露糖（Man）和N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）两种戊糖分子组成），还含有不同数目的糖分子，如岩藻糖（Fuc），甘露糖，N-乙酰葡糖胺，半乳糖（Gal），N-乙酰葡糖胺和唾液酸（Sia）（图1）。IgG通过糖基化修饰的重链CH2区与Fc受体和C1q补体结合形成免疫复合体，从而分别发挥抗体依赖的细胞介导的毒性作用（ADCC）和补体依赖的细胞毒性作用（CDC）。IgG的N-糖基化修饰可以促进或消除抗体的效应子功能[1-4]： 
  • 岩藻糖—无岩藻糖修饰的人IgG与FcγRIIIa亲和力提高50倍，ADCC作用提高100倍[3]。
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Functional Assays 的开发

       安泰吉公司已经开发了针对重组蛋白/单克隆抗体分析检测方法，以支持药物研发。我们可从客户转移方法，并进一步优化和验证，也可以基于公司团队在分析科学和生物学的技术专长来开发新的分析方法。我们开发和验证的检测方法用于重组蛋白/单克隆抗体的分析（包括生物安全性，纯度，活性，鉴别和浓度/滴度分析）。下面列举是专为单克隆抗体分析检测的常用方法。

现有方法举例

1.蛋白质鉴定： Western Blot

2.蛋白定量：UV280/Bradford/Lowrry/BCA等

3.纯度分析：SDS-PAGE还原和非还原

4.生物活性和生物学表征：基于细胞或ELISA结合活性的检测方法

5.Fab功能表征

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细胞模型构建

      安泰吉公司研发出了一套独具匠心的技术系统，称为“Toggle-In”。我们先用基因打靶技术，在CHO细胞基因组中找到一个表达的Hot-Spot，然后依次用两个载体，只用两个抗药性基因就可以实现连续、循环交替的、无上限的基因组定点插入。而且，这些CHO 细胞克隆，每个都是均质的，可以做到插入片段1:1表达（技术内容详见Toggle-In部分）。这项技术成功地解决了困扰业界多年的细胞株改造的技术瓶颈。已申请专利保护。

     目前安泰吉公司已利用该技术把增加CHO 细胞蛋白分泌、折叠、促生长抗凋亡和促总体代谢的主调控基因等6～8个基因依次转入CHO基础细胞株，针对不同的目标蛋白提供个性化的CHO细胞表达系统。除此之外，该技术还可以用于构建功能型细胞株，为药物功能评价提供模式细胞。安泰吉公司已经成功地构建了带有CD16、CD89、FcRn等不同Fc受体的模式细胞系，为靶向单抗药物的药效评价提供最合适的模式细胞系。

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